本发明涉及分子生物学领域,具体公开了一种用环介导恒温扩增法检测破伤风杆菌的方法及其试剂盒。该方法利用环介导恒温扩增技术,用上游内引物、下游内引物、上游外引物和下游外引物扩增样品DNA中的破伤风杆菌痉挛毒素基因,所述引物核苷酸序列如SEQ ID NO:1-4所示;检测扩增结果。本发明所述试剂盒包括上游内引物、下游内引物、上游外引物和下游外引物,还包括DNA快速提取液和恒温扩增液。本发明所述用环介导恒温扩增法检测破伤风杆菌的方法及其试剂盒对破伤风杆菌特异性高、灵敏度高,检测过程简单快速。
本发明涉及分子生物学领域,具体公开了一种用环介导恒温扩增法检测诺维梭菌的方法及其试剂盒。该方法利用环介导恒温扩增技术,用如SEQ ID NO:1-4所示核苷酸序列的上游内引物、下游内引物、上游外引物和下游外引物扩增样品DNA中的诺维梭菌a毒素基因,检测扩增结果。本发明所述试剂盒包括上游内引物、下游内引物、上游外引物和下游外引物,还包括DNA快速提取液和恒温扩增液。本发明所述用环介导恒温扩增法检测诺维梭菌的方法及其试剂盒对诺维梭菌特异性高、灵敏度高,检测过程简单快速。
本发明与环介导等温扩增反应有关。步骤是:(1)引物设计:根据人α-乳清蛋白基因序列设计特异引物,该引物的序列如SEQ ID NO:1-4所示。(2)建立环介导等温扩增反应方法,即以FIP、BIP为内引物,F3、B3为外引物对人α-乳清蛋白基因进行恒温扩增,得特异扩增片段。(3)对环介导恒温扩增产物进行分析:采用琼脂糖凝胶电泳和荧光染料染色对扩增产物进行分析,根据凝胶成像观察是否出现梯形条带,判定是否含有转基因成分;或在日光下肉眼观察将环介导等温扩增产物的结果。
本发明涉及检测梨火疫病菌的环介导恒温扩增引物及试剂盒。所述的引物由一对外引物和一对内引物组成,核苷酸序列分别为SEQ ID NO:1-4。试剂盒内有引物混合液、环介导等温扩增混合液、恒温扩增反应液Ⅰ,梨火疫病菌阳性对照DNA。检测梨火疫病菌的方法包括待检样品总核酸提取、LAMP恒温扩增、扩增核酸SYBR Green I荧光染色法判断反应结果。